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免疫组化学技术在病理组织中的运用情况分析

更新时间:2020-08-06 08:20点击:

   [摘要]目 的研究病理组织中免疫组织化学染色的技术方法。方法选择2011 年1月~2013年1月住院治疗的60例肿瘤患者进行研究,采用活检穿刺和免疫组化学方法进行组织固定和染色,对固定效果和染色效果进行对比,分析阳性率。结果经免疫组化染色后30例患者当中大部分患者的细胞结构都呈变异型性,28 例患者的AFP( a一Fetoprotein) 、Glypican -3均呈阳性,阳性率为93. 3%, 与手术检查结果一致,而穿刺活检中,AFP( a一Fetoprotein) 、Glypican-3阳性20例,阳性率为50.0%,差异显着(P<0.05)。结论在病理组织中应用免疫组化染色技术,能够有效提高阳性率,在免疫组化技术操作中为了减少误差,必须要重视操作步骤的规范性。
 
   [关键词]病理组织;免疫组化;技术方法
 
免疫组织化学染色技术是抗原和抗体相结合的免疫反应,通过免疫组织化学反应,使得存在于细胞中的特异性抗体显示出来,有利于在显微镜下观察诊断。为了研究免疫组化学技术在病理组织中的应用情况,选择60 例肿瘤患者进行了相关研究。
 
  1 资料与方法
 
  1. 1 临床资料 选择 2011 年 1 月 ~ 2013 年 1 月住院患者60 例进行研究,男性患者 35 例,女性患者 25 例,患者年龄在 25 ~ 60 岁,平均为( 41. 2 ± 3. 7) 岁,其中有肝细胞肝癌12 例,转移性肿瘤 38 例,肝内胆管癌 7 例,血管瘤 3 例,平均病程为 9 个月。全部患者诊断临床均符合 WHO 制定的诊断标准。所有患者均对本次研究知情,以随机标准将全部患者平均分成对照组和研究组,对比两组患者性别、年龄、疾病类型资料,无显着差异( P >0. 05) 。
  1. 2 研究方法 对照组采用穿刺活检。观察组应用免疫组化技术,具体如下:
  1. 2. 1 研究试剂 ①10% 中性缓冲甲醛固定液; ②脱水液; ③透明液; ④浸蜡液; ⑤蒸馏水; ⑥UltrasenSitiveTM SP试剂; ⑦中性树胶。以上试剂全部由福州迈新生物技术开发有限公司提供。
  1. 2. 2 免疫组化方法 ①固定切片: 每例病例取一块组织,大小为1 cm × 2 cm × 0. 2 cm,采用 10% 中性缓冲甲醛固定液将其固定2 h,用脱水液脱水1 h,透明液透明1 h,浸蜡液1 h,之后进行石蜡包埋,采用常规切片方法切片,厚度为2 μm; ②免疫组化染色: 将固定好的切片脱蜡后用 3% 的双氧水在室温下孵育10 min,后用蒸馏水洗涤3 min,共进行 3 次,之后用高压锅修复2 min,高压锅温度为 110℃,PBS 洗涤5 min,共进行 3 次,加入滴一抗,室温 37℃ 下孵育2 h,PBS 洗涤同上,加入 UltrasenSitiveTM 试剂,37℃ 孵育20 min,PBS 洗同上,之后进行 DAB 显色,蒸馏水冲洗,苏木精复染核60 min,行梯度乙醇脱水、二甲苯透明后,用中性树胶封固。
  1. 3 阳性诊断标准 免疫组化染色呈棕黄色为阳性。
 
  2 结果
 
  经免疫组化染色后 30 例患者当中的大部分患者的细胞结构都呈变异型性,28 例患者的 AFP( α - Fetoprotein) 、Glypican - 3 均呈阳性,阳性率为 93. 3% ,与手术检查结果一致,而穿刺活检中,AFP( α - Fetoprotein) 、Glypican - 3 阳性 20 例,阳性率为 50. 0%,差异显着( P <0. 05) 。12 例肝细胞肝癌患者经免疫组化诊断 6 例,确定 3 例患者已无法进行手术治疗,之后对这 3 例患者随访,发现 2 例患者已死亡,死亡率为 66. 7%; 7 例肝内胆管瘤患者行免疫组化 4例,其 CK7、CK20、CK1 呈阳性,阳性率 100%,后期 3 例患者死亡,死亡率为 75. 0%; 38 例肝脏转移性肿瘤患者行免疫组化 19 例,均找到了原发灶,阳性率 100%,后期死亡,14 例; 3 例血管瘤患者经免疫组化 2 例,实施血管瘤手术,后期随访并无复发现象,死亡 1 例,治疗成功率为 50. 0%。
 
  3 讨论
 
  免疫组织化学技术是病理诊断中的常见方法,尤其在各种肿瘤的诊断中具有较高的诊断准确率。研究中,共 60例肿瘤患者,30 例患者经免疫组化技术后,28 例患者的AFP( α - Fetoprotein) 、Glypican - 3 均呈阳性,阳性率为93. 3% ,这与临床其他研究结果相似。在不同类型的肿瘤疾病中,也能获得相对准确的判断,本次研究中免疫组化技术在肝内胆管瘤、肝脏转移性肿瘤、血管瘤中均获得了较高的阳性率。
  免疫组织化学染色是近些年来逐渐发展起来的病理技术之一,但它本身的操作很容易受到环境因素的影响,比如说固定剂、切片、抗原修复、温度、时间和人为因素的影响,导致在病理诊断中出现不应有的误诊现象。因此,在操作的过程中,严格的按照标准去操作: ①组织固定: 目前在组织固定过程中选择较多的 10% 中性缓冲甲醛固定液,相对于甲醛固定液,其固定较好,时间保持较久,能在60 d保持稳定的阳性率。②烤片: 推荐的温度是在 60 ~68℃ 的恒温箱中加热,但是需要注意的是温度不能过高;③抗原修复: 时间最好是在 5 ~ 8 min,喷汽之后的时间在2 min左右时,再把锅端开,让切片自然地冷却下来,进行下一步骤的染色; ④染色: 在免疫组织化学染色时需要进行苏木素的复染,苏木素复染不应过深,如果过深,有可能会覆盖住染色过浅的阳性细胞,影响正确的诊断。
  免疫组化显色是一种酶促的反应,它主要是经过和抗原抗体复合物的碱性磷酸酶和过氧化物酶与底物的反应,从而生成了有颜色的复合物,沉淀在组织和细胞中的抗原的位置。因为组织标本的来源的不同,抗原的含量不等,细胞的分化不一,所出现的显色反应的时间也相应不同,在染色的过程中需要对如下方面加强注意: ①在整个染色中,切片要始终保持湿润; ②在孵育过程中要合理确定孵育盒中的蒸馏水量; ③在加抗体中,选择单克隆抗体;④在孵育盒中孵育时,孵育盒要放平,包成抗体液体在组织上的均匀性,避免抗体液体流到组织一边,出现假阴性结果。
 
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