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化痰祛湿法对自发性高血压大鼠血管的保护作用

更新时间:2020-10-27 08:23点击:

摘    要:
目的:通过观察化痰祛湿法对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)的影响,探讨其对血管的保护机制。方法:采用SHR作为模型鼠,随机分为模型对照组、依那普利组、1/10依那普利组、化痰祛湿高剂量组、化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组,以近交系京都种Wistar(Wistar-Kyoto,WKY)大鼠作为空白对照组。依那普利组给予0.02g/kg的依那普利,1/10依那普利组给予0.002 g/kg的依那普利,化痰祛湿高剂量组给予中药2 g/kg,化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组给予中药2 g/kg+0.002 g/kg的依那普利,WKY组和模型对照组分别给予相应剂量的去离子水。每天上午灌胃西药,下午灌胃中药,连续给药8周。每给药两周测1次血压,末次给药后取材,留取血清,检测血管紧张素(angiotensinⅡ,AngⅡ)、一氧化氮(nitrous oxide,NO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、内皮素(endothelin,ET)的含量;取胸主动脉,进行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,观察血管组织病理学改变。结果:与模型对照组对比,从给药开始到给药8周,依那普利组、化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组的血压值均有不同程度的降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组对比,依那普利组和化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组的AngⅡ、ET含量降低、NO含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);而1/10依那普利组和化痰祛湿高剂量组血清中各个指标均有相应趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。与WKY组对比,模型对照组SHR弹性膜排列紊乱,层数增加,中膜显著增厚,部分出现内膜损伤和外膜炎症浸润现象;与模型对照组对比,各给药组的组织病理学改变均明显减轻,其中以化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组和依那普利组效果较为显著。结论:化痰祛湿法降压的机制可能与降低AngⅡ和ET的含量有关,使NO含量升高,减少氧化应激的损伤,发挥舒血管的作用,从而降低血压,与西药联用效果更佳。
 
关键词:
自发性高血压; 化痰祛湿法; 血管; 保护作用; 动物模型;
高血压是引起脑卒中、冠心病和肾功能损伤等的重要危险因素。2018年修订的《中国高血压防治指南》指出,我国成年人高血压患病率为27.9%[1,2],且患病率与年龄呈正相关。高血压属中医学“眩晕”“头痛”等范畴[3]。很多中药都有不同程度的降压作用,单味中药有川芎[4]、牛膝[5]、天麻[6]、地骨皮[7]、葛根[8,9]、山楂[10]、丹参[11]、无患子[12]、沙苑子[13]、莱菔子[14]等,中药复方有天麻双膝颗粒[15]、补益肝肾方[16]、化痰祛湿降压汤[17]等。化痰祛湿法是王守富主任医师临床常用之法,处方主要由法半夏、陈皮、茯苓、白术、天麻、钩藤等组成。本研究以自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)为研究对象,对化痰祛湿法的降压机制和对血管的保护作用进行探讨。
 
1 材料与方法
1.1 动 物
SPF级自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)和近交系京都种Wistar(Wistar-Kyoto,WKY)大鼠,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证号依次是1100111911000219,1100111911000221。
 
1.2 药品、试剂与仪器
化痰祛湿法组方:法半夏 12 g,陈皮 15 g,茯苓 15 g,白术 15 g,天麻 10 g,钩藤 30 g,蔓荆子 10 g,葛根 15 g,荷叶 10 g,川芎 15 g,泽泻 15 g。药材由河南省中医药研究院附属医院药剂科提供,均为正品。药材加8倍量水煎煮3次,每次1 h,最后浓缩至生药含量为0.2 g/mL。马来酸依那普利片,扬子江药业集团产品,批号18101611,10 mg/片; ET、AngⅡ、NO、SOD ELISA试剂盒,均为武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司产品,批号依次是2IQRK3KM4E、HQVQCZ12A3、H9YB8MBKW4、XG4A2K9Z3S。BP-2010 series 智能无创血压计,北京软隆生物技术有限公司产品;V-6振荡器、LX-800掌上离心机,均为其林贝尔仪器制造有限公司产品;JT-12J 自动组织脱水机、JB-L5石蜡包埋机,均为武汉俊杰电子有限公司产品; RM2016病理切片机,上海徕卡仪器有限公司产品;KD-P组织摊片机,浙江省金华市科迪仪器设备有限公司产品;DHG-9140A烤箱,上海慧泰仪器制造有限公司产品。
 
1.3 动物分组与给药
采用SHR作为模型鼠,随机分为模型对照组、依那普利组、1/10依那普利组、化痰祛湿高剂量、化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组,以WKY大鼠作为空白对照组。各组分别给予相应剂量药物:依那普利组给予0.02 g/kg的依那普利, 1/10依那普利组给予0.002 g/kg的依那普利,化痰祛湿高剂量组给予中药2 g/kg,化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组给予中药 2 g/kg+0.002 g/kg的依那普利,WKY组和模型对照组分别给予相应剂量的去离子水。每天上午灌胃西药,下午灌胃中药,连续给药8周。
 
1.4 检测指标
每给药两周进行1次血压测量。末次给药后,以质量分数为100 g/L的 水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,离心分离血浆,采用ELISA试剂盒检测血管紧张素(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)、一氧化氮(nitrous oxide,NO)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、内皮素(endothelin,ET)的含量;取血后,分离胸主动脉,剔除脂肪组织,用多聚甲醛固定,进行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色,观察胸主动脉组织病理学改变。
 
1.5 统计学方法
采用SPSS 19.0统计分析软件处理。计量资料数据以均数(x¯)±标准差(s)表示。服从正态分布的计量资料的组间比较采用t检验或方差分析(ANOVA),不服从正态分布时采用非参数秩和检验。检验水准α=0.05。
 
2 结 果
2.1 各组大鼠血压对比
与WKY组对比,模型对照组大鼠各个时期血压均升高,差异有统计学意义(P<0.05),说明高血压模型成功。与模型对照组对比,依那普利组、1/10依那普利组、化痰祛湿高剂量组、化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组的基础血压均没有统计学意义(P>0.05),说明具有可比性。从给药开始到给药8周,依那普利组、化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组各组血压值均有不同程度的降低,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
2.2 各组大鼠血清AngⅡ、NO、SOD、ET含量对比
与WKY组对比,模型对照组大鼠血清中AngⅡ、ET含量升高,SOD、NO含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组对比,依那普利组和化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组的AngⅡ、ET含量降低、NO含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);1/10依那普利组和化痰祛湿高剂量组的4个指标无统计学意义(P>0.05)。见表2。
2.3 各组大鼠胸主动脉组织病理学表现对比
WKY组大鼠血管弹性膜排列整齐,血管壁各层膜结构层次清晰,中膜无增厚现象。模型对照组SHR弹性膜排列紊乱,层数增加,与WKY组对比,中膜显著增厚,部分出现内膜损伤和外膜炎症浸润现象。各给药组组织病理学改变较模型对照组均有明显减轻,其中以化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组和依那普利组效果较为显著。见图1。
3 讨 论
化痰祛湿法主要用于治疗痰湿壅盛所致头昏、头沉、头重如裹、头痛、胸闷、呕吐痰涎、心悸、失眠等症,也可用于高血压、脑动脉硬化症及高脂血症见上证者。化痰祛湿方为痰夹风邪上扰所致眩晕、头痛而设,总的病机是脾虚生湿,湿痰壅遏为患。方中半夏性温味辛、燥湿化痰,降逆止呕,意在治痰;天麻味甘性平,入厥阴经,擅长平肝息火而止眩,旨在治风。两味相伍,化痰息风,为治痰夹风邪上扰所致眩晕、头痛之要药。
 
本研究选用SHR为研究对象,其是由有显著高血压症状的远交WKY雄性鼠和带有轻微高血压症状的雌性鼠交配所得到的子代,子代又通过近交连续筛选最终得到的具有自发高血压性状的大鼠[18],SHR育成后血压达200 mmHg以上。此鼠除有高血压自发率为100%特点外,还有高血压性心血管病变,适于人类的原发性高血压研究[19,20]。
 
血管纤维化是高血压对靶器官危害加剧的病理基础,血管纤维化组织病理学特征是弹力膜排列紊乱,中膜显著增厚。本实验中,模型对照组大鼠胸主动脉弹力膜排列紊乱、中膜增厚,各给药组的这些组织病理学改变均减轻,其中以依那普利组和化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组效果较为显著,提示化痰祛湿法对SHR靶器官血管损伤有一定的保护作用,且与西药联用效果更好。
 
AngⅡ是肾素-血管紧张素系统的主要活性物质,是心血管功能重要的调节剂。NO是主要的舒血管物质,具有舒张血管、清除氧自由基及抑制血小板聚集的作用[21]。SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子,可以转化有害的超氧自由基。ET是目前为止发现的最强缩血管物质,是引起与血管损伤相关疾病共同的致病因素。本实验发现,与模型对照组对比,依那普利组和化痰祛湿高剂量+1/10依那普利组的AngⅡ、ET含量降低、NO含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);1/10依那普利组和化痰祛湿高剂量组血清中各个指标均有相应趋势。此提示化痰祛湿法降压的机制可能与调节AngⅡ、ET和NO含量有关。少量的AngⅡ能使活性氧减少,减少氧化应激的损伤,使NO含量升高,发挥舒血管的作用,从而达到降低血压的作用。
 
综上所述,化痰祛湿法与依那普利联用可以降低血压,同时减少了西药依那普利的用量,提示该法与西药联用效果更好。
 
参考文献
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