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细胞形态学在初诊急性白血病诊断中的应用分析

更新时间:2021-06-08 09:59点击:

  摘    要:目的 探讨细胞形态学在初诊急性白血病诊断中的应用价值。方法 选取2018年1月至2020年3月我院确诊的117例初诊急性白血病患者,行细胞形态学、免疫学分型、细胞遗传学分型、分子生物学分型检查,分析检查结果。结果 细胞形态学、免疫学分型、细胞遗传学分型、分子生物学分型单一诊断、联合诊断与最终诊断结果符合率分别为76.92%、79.49%、22.22%、23.08%、96.58%,联合诊断与最终诊断结果符合率高于细胞形态学、免疫学分型、细胞遗传学分型、分子生物学分型单一诊断,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 细胞形态学诊断初诊急性白血病具有一定价值,联合其他诊断能提高确诊率,可指导临床治疗,以期改善患者预后。
  
  关键词:急性白血病;细胞形态学;诊断;免疫分型;
  
  急性白血病属于血液系统恶性疾病,起源于造血干细胞的恶性克隆疾病,可广泛浸润淋巴结、脾、肝等各脏器,主要表现为出血、贫血、浸润、感染等,若不及时治疗,生存期仅约为3个月[1,2]。故早期准确鉴别诊断急性白血病分型,对临床治疗方案制定至关重要。细胞形态学检查操作简便,与细胞化学染色向结合鉴别原幼细胞具有一定价值,可在基层医院应用。本研究分析细胞形态学在初诊急性白血病诊断中的应用价值,旨在为临床早期诊断急性白血病提供参考意见。
  
  1 资料与方法
  
  1.1 一般资料
  
  选取2018年1月至2020年3月我院确诊的117例初诊急性白血病患者,符合《血液病诊断及疗效标准(4版)》[3]中急性白血病相关诊断标准,其中男64例,女53例;年龄18~88岁,平均年龄(48.32±5.32)岁;AML-M5(M5)10例,AML-M4(M4)5例,AML-M3(M3)25例,AML-M1(M1)4例,AML-M0(M0)1例,AML-M2(M2)36例,MAL1例,ALL32例,AML未分型3例。
  
  1.2 方法
  
  (1)细胞形态学检查。选择骨髓小粒多、涂片好的骨髓涂片,油镜下计数200个有核细胞,计数选单核散在、细胞分布均匀区域,随后行PAS染色、POX染色、NAE染色等细胞化学染色,观察酶型、计数阳性率,严格按照《全国临床检验操作规程第三版》[4]操作。(2)免疫学分型。抽取2 ml骨髓液,肝素抗凝,24 h内使用FACSCantoII型流式细胞仪检测,分离出骨髓细胞中成熟细胞群、幼稚细胞群。选择相应系列的免疫荧光标记的单克隆抗体检测免疫表型,对其抗原表达情况进行分析。CD34和胞质内抗原>10%、膜抗原>20%,则结果判断为阳性。(3)染色体核型。抽取2 ml骨髓液,肝素抗凝,根据2×106/ml细胞密度,加入细胞染色体培养液,过夜培养,滴加秋水仙胺0.05 μl/ml, 离心取细胞,将按1:3比例配置冰醋酸和甲醇,重复固定3次,滴片,核型易R显带法分析。(4)分子生物学。抽取2 ml骨髓液,肝素抗凝,滴加2 ml生理盐水稀释,分离单个核细胞,用淋巴细胞分离液分离。裂解单个核细胞,提取并测定RNA。取反应体系20 μl, 以试剂盒提供的特异引物、模板、逆转录酶在37℃逆转录反应1 h获取cDNA,将其作为模板,行多重巢式PCR反应,观察分析结果。
  
  1.3 观察指标
  
  (1)分析分子生物学分型、细胞形态学、细胞遗传学分型、免疫学分型单一诊断和联合诊断对急性白血病检出率。(2)分析细胞形态学骨髓细胞学形态。
  
  1.4 统计学方法
  
  应用SPSS 21.0软件分析数据,以(n,%)表示计数资料,用χ2检验;用(x¯±s)表示计量资料,用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
  
  2 结 果
  
  2.1 不同检测方式对急性白血病检出率分析
  
  免疫学分型、细胞形态学、分子生物学分型、细胞遗传学分型单一和联合诊断与最终诊断结果符合率分别为76.92%(90/117)、79.49%(93/117)、22.22%(26/117)、23.08%(27/117)、96.58%(113/117)。联合诊断与最终诊断结果符合率高于免疫学分型、细胞形态学、分子生物学分型、细胞遗传学分型单一诊断,差异有统计学意义(χ2=19.670、16.228、134.127、133.488,P=0.000、0.000、0.000)。见表1。
  
  表1 急性白细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、 分子生物学分型单一与联合诊断结果分析(n)
  
  2.2 细胞形态学骨髓细胞学形态
  
  (1)原始粒细胞。胞体多为类圆形或圆形,胞浆量少绕于核周,胞核呈类圆形或圆形,居中或稍偏位,胞浆见细小嗜天青颗粒或无颗粒,可见1个或数个淡蓝色核仁。POX染色呈弱阳性,阳性反应物颗粒聚集、浓缩、相对粗大,见图1。NAE染色呈弱阳性或阴性,阳性反应物不被Na F抑制,表现为弥散状。PAS染色多为弱阳性,以细颗粒弥散状为阳性反应物表现。(2)M2b细胞。①分化程度差:原始细胞胞核存在凹陷且常伴有常见“黄沙土样”改变,核仁常见,易见1或2根细长Auer小体。POX染色呈“团块样””反应,见图2;②分化程度好:胞浆量较多,细胞核可见如“哑铃状”分叶不良,核仁、内外浆常见,核浆发育明显不平衡,布满“黄沙土样”的中性颗粒。POX染色呈强阳性反应,见图3。(3)M3细胞:胞浆布满嗜天青颗粒伴融合,细胞核呈“蝴蝶状”或“爆米花样”,核上常被颗粒覆盖,部分可见数条Auer小体,或“柴捆样”Auer小体,或内外浆。POX染色呈强阳性反应,见图4。
  
  3 讨 论
  
  细胞作为生命体最基本的功能和结构组成单位,形态存在多样性,一般情况下,细胞的外部压力与内在结构保持稳定,但在病理状态下时,细胞大小、数量、形状等已出现变化[5,6]。因此,细胞形态学检测是鉴别诊断血液疾病的常用手段。急性白血病形态学分型是通过细胞化学染色和细胞形态学相结合实施分型,可诊断鉴别疾病亚型,是诊断白血病的基础。本研究中,细胞形态学、免疫学分型、细胞遗传学分型、分子生物学分型诊断急性白血病符合率为76.92、79.49、22.22、23.08%,提示细胞形态学、免疫学分型诊断急性白血病有一定价值。细胞形态学具有免疫分型难以替代的优势,如以下几点:(1)经济、操作简单、快速、分析直观、分型标准明确;(2)流式细胞仪检测免疫表型检测时会受到操作、骨髓稀释等多种因素影响,干扰原始细胞计数的准确性。细胞形态学检查能及时发现血细胞计数低的急性白血病患者,如AML-M3等,存在典型性形态学特征,能直接根据形态学做出准确诊断,为病情抢救争取时间。(3)流式细胞仪难以鉴别单、粒白血病分型,尤其诊断急性单核细胞白细胞分型难度较大。经细胞形态学检查时,可通过观察POX酶型等细胞化学染色表现,做出诊断,相对明确区分M5或M2。但细胞形态学单一诊断时检测时间相对较长等不足。本研究中,联合诊断与最终诊断结果符合率高于细胞胞形态学、免疫学分型、细胞遗传学分型、分子生物学分型单一诊断,提示在细胞形态学检查基础上,联合其他检查手段,经多方面论治,可进一步提高确诊率,减少误诊事件发生。
  
  参考文献
  
  [1]葛丽卫,王笑颜流式细胞术用于白血病外周血细胞检测对急性白血病复发判断的意义[J].检验医学,2018,33(3):239-241.
  
  [2]张慧敏,刘丹丹,陈苏宁,等283例急性白血病初诊时外周血象和髓象特点分析[J]中国血液流变学杂志,2018,28(4)-448-45.
  
  [3]沈悌,赵永强血液病诊断及疗效标准[M]第4版北京:科学出版社,2018:214-218.
  
  [4]许根友学习《全国临床检验操作规程》第一篇对检验 工作的实际意义[J]第3版临床血液学杂志(输血与检验版),2010,23(6).759-760.
  
  [5]鲍丽娟,颜慕霞,顾晓琼,等.5例儿童急性巨核细胞白血病的实验室检测[J].热带医学杂志,2018, 18(7):877-880.
  
  [6]杨硕,刘新颖,王芳,等初诊儿童急性淋巴细胞白血病细胞形态学及免疫表型特征[J]中国热带医学,2017,17(2)-:167-170,175.

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