27医学论文范文网

主页
分享医学论文范文

极化过程影响巨噬细胞的铁代谢

更新时间:2021-05-28 08:59点击:

  摘    要:本文旨在研究巨噬细胞极化过程对自身铁代谢调节的影响。用20 ng/mLγ干扰素(interferon gamma, IFN-γ)刺激猪肺泡巨噬细胞(3D4/2细胞) 24 h,诱导其为M1型巨噬细胞,另外用10 ng/mL白细胞介素4 (interleukin-4, IL-4)联合10 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor, M-CSF)共同刺激3D4/2细胞24 h,诱导其为M2型巨噬细胞,用实时定量PCR、免疫荧光染色法和Western bolt检测巨噬细胞炎症因子和铁代谢相关蛋白的表达。收集M1/M2型巨噬细胞培养液上清液与猪肠上皮IPEC-J2细胞共培养,用CCK-8法检测IPEC-J2的增殖能力。给M1/M2型巨噬细胞外源添加柠檬酸铁铵(ammonium ferric citrate, FAC),用异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(fluorescein isothiocyanate-dextran, FITC-dextran)及流式细胞术检测3D4/2细胞吞噬能力。结果显示,和对照组相比,M1型巨噬细胞铁调素、铁蛋白重链、轻链和脂质运载蛋白-2 mRNA表达水平上调,胞内铁含量增加,显示出铁保留的表型,并且铁可增强M1型巨噬细胞的吞噬能力;M2型巨噬细胞上述基因mRNA表达水平无显著变化,而铁转运蛋白和转铁蛋白受体mRNA表达水平上调,胞内铁含量减少,显示出铁释放的表型,并且其培养液上清液能促进IPEC-J2细胞增殖。上述结果提示,M1型巨噬细胞倾向于将铁保留在细胞内,减少胞外铁含量,从而抑制胞外菌的增殖;而M2型巨噬细胞倾向于释放铁,有助于周围细胞的增殖,从而促进组织修复。
  
  关键词:铁代谢; M1/M2型巨噬细胞; 细胞增殖;
  
  Polarized activation affects iron metabolism in macrophages
  
  LI Yun-Qin LIANG Li GAN Zhen-Shun TANG Xue-You DU Hua-Hua
  
  Analysis Center of Agrobiology and Environmental Science, Zhejiang University Key Laboratory of Animal Molecular Nutrition, Ministry of Education, Zhejiang University College of Animal Science, Zhejiang University
  
  Abstract:The aim of this study was to investigate the effects of polarization program on the ability of macrophages to regulate iron metabolism. M1 and M2 macrophages were propagated in vitro from porcine alveolar macrophages 3D4/2 and polarized by cytokines. The 3D4/2 macrophages were treated with 20 ng/mL interferon gamma(IFN-γ) and 10 ng/mL interleukin-4(IL-4) combined with 10 ng/mL macrophage colony-stimulating factor(M-CSF) to induce polarization to M1 and M2, respectively. After incubation for 24 h, the expression levels of inflammatory factors and iron-metabolism genes were determined using real-time qPCR, Western bot and immunofluorescence. The M1/M2 macrophages culture media supernatant was collected and used to treat porcine intestinal epithelial cells IPEC-J2. The proliferation ability of IPEC-J2 was detected using CCK-8 assay kit. Following exogenous addition of ammonium ferric citrate(FAC) to M1/M2 macrophages, the phagocytic function of macrophages was detected using fluorescein isothiocyanate-dextran(FITC-dextran) and flow cytometry. The results showed that, compared with control, M1 macrophages had higher mRNA levels of iron storage proteins(ferritin heavy and light polypeptide, i.e. FtH and FtL), hepcidin and lipocalin-2, as well as iron content. Moreover, iron enhanced the ability of M1 macrophages to phagocytize FITC-dextran. There was no significant change in these m RNA expression levels in M2 macrophages, but the mRNA expression levels of ferroportin and transferrin receptor were up-regulated. In addition, the conditioned media supernatant from M2 macrophages promoted cell proliferation of IPEC-J2. These findings indicate that M1 macrophages tend to lock iron in the cell and reduce extracellular iron content, thereby inhibiting the proliferation of extracellular bacteria. While M2 macrophages tend to excrete iron, which contributes to the proliferation of surrounding cells and thus promotes tissue repair.
  
  Keyword:iron metabolism; M1 macrophage; M2 macrophage; cell proliferation;
  
  巨噬细胞是机体内一类重要的免疫细胞,具有较强可塑性,高度异质性和多种免疫功能。在参与免疫反应的过程中,不同组织器官的巨噬细胞可随微环境的变化极化为经典激活的M1型巨噬细胞和替代激活的M2型巨噬细胞[1]。在功能上,M1型巨噬细胞具有很强的内吞能力和微生物杀伤作用,从而促进炎症反应的发生并清除病原体,而M2型巨噬细胞则抑制炎症反应,并修复受损组织[2]。早在20世纪60年代,有学者发现小鼠在感染分枝杆菌或李斯特菌后,巨噬细胞对微生物的抵抗能力得到提高,这种变化是刺激依赖性的,而非抗原特异性[3]。随后研究显示,上述巨噬细胞的活化是由特异性活化的自然杀伤细胞、辅助性T细胞(helper T cell,Th)、CD8+T细胞等的产物细胞因子γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)以及革兰氏阴性细菌外膜的组成成分脂多糖诱导引起的[4]。巨噬细胞向M1型极化以后,吞噬功能得到提高,并分泌大量促炎因子,包括一氧化氮、白细胞介素(interleukin,IL,如IL-6、IL-1β、IL-12、IL-8)、TNF-α和大量趋化因子等[5]。相反,M2型巨噬细胞是机体消除炎症反应的特征细胞,Th2细胞分泌的细胞因子IL-4能诱导产生M2型巨噬细胞,具有这种诱导作用的还有IL-10、转化生长因子、维生素D和糖皮质激素等[6]。M2型巨噬细胞除了具有较强的抗炎活性外,还起到修复组织创伤、重建机体稳态、调节组织代谢的作用[7]。
  
  巨噬细胞在机体铁代谢的调节中起着不可或缺的作用。一方面,巨噬细胞吞噬衰老或受损的红细胞并分解血红素,重新回收利用红细胞中的铁[8]。另一方面,巨噬细胞调控胞内铁的可使用性,通过限制铁抑制病原体的生长[9,10]。巨噬细胞不仅可以识别和吞噬细菌,还可以产生螯合铁的蛋白,如乳铁蛋白和脂质运载蛋白-2 (lipocalin-2,Lcn2)等,削弱细菌与铁的接触,从而抑制细菌的生长[11,12]。因此阐明巨噬细胞的极化过程对其自身铁代谢的影响对于理解机体如何对抗细菌入侵或炎症具有重要意义。
  
  铁是机体必需的营养素,也是细胞许多基本功能的重要辅助因子,因此细胞内铁稳态和体内铁平衡被严格调节。铁代谢涉及铁的吸收、储存和排出等过程,主要受铁调素、铁调节蛋白(iron regulatory protein,IRP)和铁反应元件系统调控[13,14,15]。本研究组前期结果显示,铁可通过抑制信号转导及转录激活蛋白1 (signal transducer and activator of transcription1,STAT-1)来降低M1型巨噬细胞的极化[16]。本研究以细胞因子刺激巨噬细胞极化,探讨M1/M2型巨噬细胞的铁代谢与其功能的变化,进一步研究不同极化类型巨噬细胞对应的铁代谢表型的生理意义。
  
  1 材料与方法
  
  1.1 主要试剂
  
  Trizol试剂、柠檬酸铁铵(ammonium ferric citrate,FAC)、荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-dextran)购自Sigma公司;c DNA Achieve Kit试剂盒购自Thermo公司;荧光定量PCR试剂盒购自罗氏公司;诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶-1 (arginase-1,Arg-1)、β-actin单克隆抗体购自Abcam公司;山羊抗兔二抗、山羊抗鼠二抗购自华安生物公司;Cy3荧光二抗、4’6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色液、细胞裂解液购自凯基公司;增强化学发光(enhanced chemiluminescence,ECL)底物购自Biosharp公司;CCK-8试剂盒购自Dojindo公司;IFN-γ、IL-4、巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)购自PeproTech公司;荧光定量PCR引物由擎科生物公司合成。
  
  1.2 细胞培养与极化处理
  
  猪肺泡巨噬细胞(3D4/2细胞)购自中国科学院细胞库(上海),培养在RPMI-1640中,培养液含10%胎牛血清,青霉素(100 IU/mL)和链霉素(100μg/mL)。细胞消化传代后,按每孔1×106个接种至6孔板,加入完全培养基,过夜生长直到80%融合更换为无血清培养基。3D4/2细胞随机分组:对照组(RPMI-1640培养基培养,不添加任何细胞因子)、M1组(RPMI-1640培养基培养,添加20 ng/mL IFN-γ)、M2组(RPMI-1640培养基培养,添加10 ng/mL IL-4和10 ng/mL M-CSF)。用20 ng/mL IFN-γ诱导巨噬细胞向M1型极化,10 ng/mL IL-4联合10 ng/mL M-CSF共同诱导巨噬细胞向M2型极化[17]。收集M1和M2诱导6 h、12 h、24 h时的细胞,通过检测M1和M2标识因子的表达来验证巨噬细胞的极化,使用极化诱导24 h的3D4/2细胞用于后续实验。用于检测M1型巨噬细胞的细胞因子是IL-6、IL-1β、TNF-α和iNOS,用于检测M2型巨噬细胞的细胞因子是Arg-1、甘露糖受体-1 (mannose receptor-1,Mrc-1)、STAT-6[6,18,19]。
  
  1.3 RNA提取及实时定量PCR
  
  用Trizol试剂提取3D4/2细胞总RNA,并用超微量分光光度计(NanoDrop ND-1000,Thermo Fisher Scientific,美国)测定浓度。使用cDNA Achieve Kit进行反转录。实时定量PCR使用Fast Start Universal SYBR Green Master(ROX)染料和实时定量PCR仪(ABI 7500,Applied Biosystems,美国)进行。以β-actin为内参,目的基因mRNA相对表达量采用2-△△Ct方法进行计算,相关引物信息见表1。
  
  1.4 巨噬细胞铁含量测定
  
  将细胞样品于混合酸(浓盐酸:浓硝酸=1:3)中消化,并将1 000μg/mL的铁储备液(国家标准样品,购自浙江大学设备科)稀释成1、2和3μg/mL三个梯度的标准液作为对照,通过原子吸收光谱分析仪(ZEEnit700,Analytik Jena,德国)检测样品中的铁含量,每个样品至少含有1×1010个细胞。
  
  1.5 免疫荧光染色法
  
  将3D4/2细胞与i NOS抗体(1:500)或Arg-1抗体(1:500)在室温下孵育1 h,随后与Cy3荧光二抗避光孵育1 h。用PBS洗涤后,将细胞在含有40 mg/mL DAPI的培养基中孵育5 min,随后在激光共聚焦显微镜(LSM710,Zeiss,德国)下采集图像,用Image-Pro Plus 6.0对图像进行相对定量分析。
  
  1.6 Western blot
  
  收集细胞,经PBS洗涤3次,加入含蛋白酶抑制剂的细胞裂解液中裂解细胞后,12 000 g 4°C离心20 min。小心吸出上清液,用BCA法进行蛋白质定量。用4%和20%聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白质样品,湿转法将分离胶的蛋白转移至PVDF膜上,随后分别加入抗β-actin (1:1 000)、i NOS (1:1 000)和Arg-1 (1:1 000)抗体4°C孵育过夜,第二天二抗室温孵育1 h,ECL化学发光底物显影。以β-actin为内参蛋白,用ImageJ软件对蛋白结果进行相对定量。
  
  1.7 CCK-8法检测细胞增殖
  
  猪肠上皮IPEC-J2细胞购自中国科学院细胞库(上海),用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养。IPEC-J2细胞在对照组、M1或M2型巨噬细胞的培养液上清液中生长48 h,通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖。
  
  表1.实时荧光定量PCR引物序列
  
  1.8 巨噬细胞吞噬功能测定
  
  将3D4/2细胞在25μg/m L FAC存在下极化24 h,随后用1 mg/mL FITC-dextran在37°C下孵育1 h,通过流式细胞仪(MACS-Quant VYB,Miltenyi Biotec,德国)分析巨噬细胞对FITC-dextran的吞噬率。
  
  1.9 统计学分析
  
  数据以mean±SEM表示,使用SPSS 20.0软件进行统计检验,多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用Tukey-Kramer HSD法,P<0.05时认为差异具统计学意义。
  
  2 结果
  
  2.1 细胞因子诱导猪肺泡巨噬细胞3D4/2极化
  
  巨噬细胞诱导极化后,IFN-γ处理的3D4/2细胞表现出典型的M1型基因转录谱,而IL-4和M-CSF共同处理的3D4/2细胞具有典型的M2型基因转录谱。与对照组相比,M1型巨噬细胞标识因子IL-6、IL-1β、TNF-α和iNOS mRNA表达水平显著上调(图1A~D),其中IL-6 (图1A)、TNF-α(图1C)和i NOS (图1D)的基因表达水平在刺激12 h后显著上调(P<0.01),IL-1β(图1B)则在24 h后显著上调(P<0.01)。与对照组相比,M2型巨噬细胞标识因子Arg-1、Mrc-1和STAT-6 mRNA表达水平显著上调(图1E~G),其中Arg-1 (图1E)在刺激6 h后显著上调(P<0.01),而Mrc-1 (图1F)和STAT-6(图1G)在刺激12 h时显著上调(P<0.05)。
  
  为了进一步确认3D4/2细胞的极化类型,使用免疫荧光染色检测M1型巨噬细胞标记物i NOS和M2型巨噬细胞标记物Arg-1。免疫荧光染色检测结果显示,与对照组相比,M1组的i NOS表达显著上调,M2组没有显著变化;相反,M2组的Arg-1表达显著上调,M1组没有显著变化(图1H)。与免疫荧光染色检测结果一致,Western blot结果显示,和对照组相比,M1组高表达M1标记物iNOS,M2组高表达M2标记物Arg-1 (图1I)。上述结果说明M1和M2型巨噬细胞极化诱导成功。
  
  2.2 M1/M2型巨噬细胞的铁代谢
  
  与对照组相比,M1型巨噬细胞的铁调节蛋白IRP1 (图2A)和IRP2 (图2B)的m RNA水平显著下调(P<0.05),铁稳态的主要调节者铁调素(图2C)、与铁储存有关的铁蛋白重链(ferritin heavy polypeptide,Ft H,图2E)和铁蛋白轻链(ferritin light polypeptide,FtL,图2F) mRNA水平显著上调(P<0.01)。相反,上述基因mRNA表达水平在M2型巨噬细胞中无显著变化,而胞内铁主要的出口——铁转运蛋白(ferroportin,FPN)(图2D)和转铁蛋白受体(transferrin receptor,TFRC)(图2G) mRNA水平显著提高(P<0.05)。与M1相比,M2铁调素(图2C)、FtH (图2E)和Ft L (图2F)的m RNA表达水平较低(P<0.05),TFRC (图2G) mRNA表达水平较高(P<0.01)。此外,与对照组相比,M1型巨噬细胞Lcn2 (图2H)m RNA表达水平显著上调(P<0.01)。以上结果表明,M1型巨噬细胞倾向于将铁保留在细胞内,而M2型巨噬细胞倾向于排出细胞内的铁。与m RNA结果一致,原子吸收光谱结果(图2I)显示,与对照组相比,M1型巨噬细胞的胞内铁含量显著增加(P<0.05),而与M1型巨噬细胞相比,M2型巨噬细胞的胞内铁含量显著降低(P<0.01)。
  
  2.3 M1/M2型巨噬细胞不同铁代谢表型影响细胞增殖
  
  由于铁是DNA合成的重要辅助因子[13],所以本研究检测了外源铁存在的情况下巨噬细胞的增殖能力,进一步了解M1/M2型巨噬细胞不同铁稳态调节的生理意义。当向培养基中添加小于12.5μmol/L FAC时,巨噬细胞增殖表现出浓度依赖的趋势,不过没有显著性变化(图3A),而且一定浓度的环境铁(小于50μmol/L FAC)不会对巨噬细胞的生长产生负面影响。此外,用M1/M2型巨噬细胞上清液分别培养IPEC-J2细胞时,与对照组培养基上清液培养的细胞相比,IPEC-J2细胞在M1培养基上清中的活细胞数量减少28%,而在M2培养基上清中增加25%(图3B),说明M2的铁代谢表型可以促进IPEC-J2细胞增殖。
  
  2.4 铁增强M1型巨噬细胞的吞噬能力
  
  为了确定M1/M2型巨噬细胞的铁代谢表型对自身吞噬作用的影响,本研究通过流式细胞术检测外源铁对巨噬细胞吞噬FITC-dextran的影响。结果(图3C)显示,外源添加FAC显著提高M1型巨噬细胞对FITC-dextran的摄取,但是对M2型巨噬细胞没有影响,说明铁可以增强M1型巨噬细胞的吞噬能力。
  
  3 讨论
  
  本研究结果显示,IFN-γ诱导的M1型巨噬细胞高表达促炎细胞因子(IL-6、IL-1β、TNF-α),并产生大量促进氧和氮自由基生成的酶(iNOS),以增加其对病原体的杀伤力。相反,IL-4和M-CSF共同诱导的M2型巨噬细胞的特征是Arg-1、Mrc-1和STAT-6表达显著增加。巨噬细胞极化后基因的表达谱与细胞因子、趋化因子和生长因子有关[15]。本研究结果表明,与铁稳态相关的基因表达在巨噬细胞M1和M2型中存在较大的差异。铁一般通过两种方式进入巨噬细胞。一方面,铁离子先被还原为二价亚铁离子,通过二价金属转运蛋白1 (divalent metal transporter,DMT1)转运至细胞内[20]。另一方面,铁离子与转铁蛋白结合,随后与巨噬细胞表面的受体TFRC结合[21]。该复合物通过内吞作用进入细胞内。铁进入细胞后首先会贮存在可变铁池(labile iron pool,LIP)中,一部分用于细胞中某些酶的合成,另一部分铁以FtH或FtL被储存起来,或通过FPN转运至巨噬细胞外[22]。上述过程大部分情况下是在基因的转录和转录后水平调控进行的[15],因此本研究检测了巨噬细胞铁相关基因的m RNA水平,观察细胞铁代谢的变化。结果显示,M1型巨噬细胞高表达铁调素、FtH、FtL和Lcn2,低表达IRPs和FPN。上调的铁调素会将结合的FPN降解,限制胞内铁的释放,从而抵御入侵机体的胞外病原体。与此同时,通过上调FtH、FtL和下调IRP,M1型巨噬细胞可保护自身免受氧化损伤并进一步限制微生物对铁的利用。此外,上调的Lcn2可以通过螯合细菌的铁载体争夺铁来限制其生长[23]。铁相关基因在M2型巨噬细胞中的表达谱与M1相反,M2低表达铁调素、Ft H、Ft L和Lcn2,高表达IRP2、FPN、TFRC。M2通过增加TFRC的表达量来提高对铁的吸收,而低含量的Ft H和Ft L无法储存铁,上调的FPN增强了铁的释放,这些结果与人外周血单核细胞和小鼠巨噬细胞的研究结果一致[24,25]。巨噬细胞铁调节基因表达的变化会引起胞内铁含量的变化,本研究结果显示M1型巨噬细胞胞内铁含量较高,而M2型巨噬细胞胞内铁含量较低。
  
  图1.M1/M2型巨噬细胞标识因子的表达
  
  图2.铁代谢相关因子在M1/M2型巨噬细胞中的表达及细胞内铁含量的变化
  
  图3.巨噬细胞铁释放表型对IPEC-J2增殖及外源铁对巨噬细胞吞噬能力的影响
  
  铁几乎是所有活细胞必需的微量营养素。在感染性疾病中,无论是入侵的病原体还是哺乳动物细胞,都需要铁来维持它们的功能、新陈代谢和增殖[26]。本研究结果显示,在培养基中添加50μmol/L以内浓度的FAC不会对细胞的增殖产生负面影响,而且在较低铁浓度范围(3.125~12.5μmol/L)内,细胞增殖显示出浓度依赖性的趋势,这说明低浓度的环境铁能维持细胞的生长。同时,M2的铁代谢表型可促进猪肠道上皮IPEC-J2细胞的增殖。在巨噬细胞的极化过程中,本研究没有额外添加铁,所以M1/M2型巨噬细胞的铁总量是一致的,而M1型巨噬细胞胞内铁高于M2型巨噬细胞,我们推测M2型胞外铁即培养基中的铁含量要高于M1型,从而促进了细胞的增殖,这有助于组织的修复与再生[7]。吞噬作用在巨噬细胞介导的宿主防御中可以清除入侵病原体[27],本研究结果显示铁可以增强M1型巨噬细胞的吞噬能力。
  
  图4.M1/M2型巨噬细胞的铁处理模式
  
  综上所述,在不同的刺激下巨噬细胞主要被极化为M1或M2两种表型,并具有不同的铁处理模式(图4)。IFN-γ诱导的M1型巨噬细胞高表达铁存储相关基因,显示出铁保留的表型,有助于炎症的发生,也可能通过扣压铁而抑制胞外细菌的增殖。相反,IL-4和M-CSF诱导的M2型巨噬细胞高表达铁排出相关基因,显示出铁释放的表型,有助于周围细胞的增殖,从而促进组织修复。本研究从铁代谢的角度探究M1/M2型巨噬细胞的生理功能,为巨噬细胞极化在细菌入侵机体或发生炎症时发挥的作用提供理论依据。
  
  参考文献
  
  [1] Mantovani A,Sica A,Locati M.New vistas on macrophage differentiation and activation.Eur J Immunol 2007;37(1):14-16.
  
  [2] Martinez FO,Sica A,Mantovani A,Locati M.Macrophage activation and polarization.Front Biosci 2008;13:453-461.
  
  [3] Mackaness GB.The immunological basis of acquired cellular resistance.J Exp Med 1964;120(1):105-120.
  
  [4] Mosser DM.The many faces of macrophage activation.JLeukoc Biol 2003;73(2):209-212.
  
  [5] Benoit M,Desnues B,Mege JL.Macrophage polarization in bacterial infections.J Immunol 2008;181(6):3733-3739.
  
  [6] Fang WQ,Deng ZY,Benadjaoud F,Yang DF,Yang CZ,Shi GP.Regulatory T cells promote adipocyte beiging in subcutaneous adipose tissue.FASEB J 2020;34(7):9755-9770.
  
  [7] Jung M,Mertens C,Brüne B.Macrophage iron homeostasis and polarization in the context of cancer.Immunobiology2015;220(2):295-304.
  
  [8] Hentze MW,Muckenthaler MU,Galy B,Camaschella C.Two to tango:regulation of mammalian iron metabolism.Cell2010;142(1):24-38.
  
  [9] Ong ST,Ho JZ,Ho B,Ding JL.Iron-withholding strategy in innate immunity.Immunobiology 2006;211(4):295-314.
  
  [10] Gan ZS,Tang XY,Wang ZJ,Li JH,Wang Z,Du HH.Regulation of macrophage iron homeostasis is associated with the localization of bacteria.Metallomics 2019;11(2):454-461.
  
  [11] Cassat JE,Skaar EP.Iron in infection and immunity.Cell Host Microbe 2013;13(5):509-519.
  
  [12] Soares MP,Weiss G.The iron age of host-microbe interactions.EMBO Rep 2015;16(11):1482-1500.
  
  [13] Wilkinson N,Pantopoulos K.The IRP/IRE system in vivo:insights from mouse models.Front Pharmacol 2014;5:176.
  
  [14] Nemeth E,Tuttle MS,Powelson J,Vaughn MB,Donovan A,Ward DM,Ganz T,Kaplan J.Hepcidin regulates cellular iron efflux by binding to ferroportin and inducing its internalization.Science 2004;306(5704):2090-2093.
  
  [15] Martinez FO,Gordon S,Locati M,Mantovani A.Transcriptional profiling of the human monocyte-to-macrophage differentiation and polarization:new molecules and patterns of gene expression.J Immunol 2006;177(10):7303-7311.
  
  [16] Gan ZS,Wang QQ,Li JH,Wang XL,Wang YZ,Du HH.Iron reduces M1 macrophage polarization in RAW264.7macrophages associated with inhibition of STAT1.Mediators Inflamm 2017;2017:8570818.
  
  [17] Gordon S,Martinez FO.Alternative activation of macrophages:mechanism and functions.Immunity 2010;32(5):593-604.
  
  [18] Xu Y,Cui KX,Li J,Tang XY,Lin JQ,Lu X,Huang R,Yang BY,Shi YX,Ye D,Huang JJ,Yu SS,Liang XL.Melatonin attenuates choroidal neovascularization by regulating macrophage/microglia polarization via inhibition of RhoA/ROCKsignaling pathway.J Pineal Res 2020;69(1):e12660.
  
  [19] Lu XX,Li N,Zhao L,Guo D,Yi HF,Yang LY,Liu X,Sun DM,Nian H,Wei RH.Human umbilical cord mesenchymal stem cells alleviate ongoing autoimmune dacryoadenitis in rabbits via polarizing macrophages into an anti-inflammatory phenotype.Exp Eye Res 2020;191:107905.
  
  [20] Andrews NC.The iron transporter DMT1.Int J Biochem Cell Biol 1999;31(10):991-994.
  
  [21] Kühn LC.The transferrin receptor:a key function in iron metabolism.Schweiz Med Wochenschr 1989;119(39):1319-1326.
  
  [22] Soares MP,Hamza I.Macrophages and iron metabolism.Immunity 2016;44(3):492-504.
  
  [23] Flo TH,Smith KD,Sato S,Rodriguez DJ,Holmes MA,Strong RK,Akira S,Aderem A.Lipocalin 2 mediates an innate immune response to bacterial infection by sequestrating iron.Nature 2004;432(7019):917-921.
  
  [24] Corna G,Campana L,Pignatti E,Castiglioni A,Tagliafico E,Bosurgi L,Campanella A,Brunelli S,Manfredi AA,Apostoli P,Silvestri L,Camaschella C,Rovere-Querini P.Polarization dictates iron handling by inflammatory and alternatively activated macrophages.Haematologica 2010;95(11):1814-1822.
  
  [25] Recalcati S,Locati M,Marini A,Santambrogio P,Zaninotto F,De Pizzol M,Zammataro L,Girelli D,Cairo G.Differential regulation of iron homeostasis during human macrophage polarized activation.Eur J Immunol 2010;40(3):824-835.
  
  [26] Nairz M,Weiss G.Iron in infection and immunity.Mol Aspects Med 2020;75:100864.
  
  [27] Uribe-Querol E,Rosales C.Phagocytosis:Our current understanding of a universal biological process.Front Immunol 2020;11:1066.

推荐文章

在线客服