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延边地区90岁以上老人细胞遗传学研究

更新时间:2020-08-19 08:40点击:

   摘要:对30名长寿老人进行细胞遗传学分析,包括外周血淋巴细胞分裂指数、染色体众数及畸变率。结果分裂指数为5. 8%,二倍体为88. 95%,超二倍体为3. 45%,畸变总数为2. 11%.得出结论是超二倍体升高和畸变细胞总数明显增加可做为衰老的标志之- -。
 
   关键词:长寿;遗传;畸变率
 
 1 引言
 
  随着中国经济的快速发展,人民的生活水平不断提高,中国人民的寿命也不断提高,现在中国人的平均寿命已经达到 75 岁。中国将逐渐走进老年社会。人体衰老是有机体固有的规律。研究人类长寿的原因是探讨延长寿命、揭开长寿之谜的重要途径之一。衰老的机制目前尚不十分清楚。Hayflick 发现,细胞质对细胞衰老的速度不起作用,确定细胞继续分裂增殖能力的物质在细胞核内.细胞核的主要成分是遗传的物质基础即染色体。因此,研究染色体变化与衰老之间的关系是当前老年医学研究的重要课题。我国对老年人细胞遗传学研究不多,我们对延边地区 90 岁以上老人进行细胞遗传学研究,对其中 30 例做了细胞遗传学分析。
 
  2 研究对象
 
  30 例均为 90 岁以上的长寿老人,年龄 90~107岁,男性 11 人,女性 19 人,均为汉族。大部分为城市居民,生活都能自理,少数人还能参加适当的体力劳动。采血前全面体检,以无遗传病、三个月内无病毒感染及一年内未受 X 线照射者为选例对象。以延吉市人民医院细胞遗传室 2012 年检查的60 名壮年人染色体资料为对照组。
 
  3 制备细胞培养及染色体标本
 
  3.1 培养基的组成
 
  RPM164(日本产)80ml,小牛血清(长春生物制品所)20ml,PHA(Difco)1ml,双抗(青链霉素各 1 万单位/ml)1ml,混匀,以 5 %碳酸氢钠调 PH至 7.2,分装每瓶 4ml,冰箱保存。
 
  3.2 培养与制法
 
  常规静脉采血 1ml(肝素抗凝),用 6 号针头将23 滴抗凝血接种于培养瓶内,置于 37℃耐恒温箱内培养 72h.培养期间每隔 12h 轻轻摇晃培养瓶一次,以便使血细胞充分利用营养物资。收获前 6h 加秋水仙素,气干法制片,姬姆萨染色 15min.
 
  3.3 求分列指数
 
  在高倍镜下随机统计 1,000 个有核细胞,记录分裂中期细胞数。求出分裂指数。选出 16 名青壮年人的分裂指数为对照组。
 
  3.4 染色体核型分析
 
  先在低倍镜下选择背景清晰,染色体收缩适度,无重叠或重叠不超过二个和无失散现象的分裂中期相,再用油镜观察每个分裂中期和染色体的数目、形态。只记录 2n 加减 2 的染色体数,再按 WHO推荐的方法做染色体畸变分析,每种畸变均经 2 人以上核对证实。每份标本观察 50~100 个细胞分裂相。
 
  4 检查对象分组及检测结果
 
  把 30 份标本阅完并详细填写表格后,再按被检查对象的性别、寿斑及长寿家族史分为三组,以观察染色体畸变与性别是否相关。检查结果如下。
 
  4.1 分裂指数
 
  试镜组共统计淋巴细胞 30,000 个,其中分列中期细胞 1,762 个,分裂指数为 5.87%对照组共统计16,000 个淋巴细胞,其中分列中期细胞为 992 个,分裂指数为 6.20%.
 
  4.2 染色体众数(表 1)
 
  从表 1 可以看出,实验组超二倍体与对照组比较,差异非常显着( p<0.05 )。表明延边地区长寿组二倍体降低,超二倍体明显增高。其他各项变化不明显。【1】
4.3 染色体自然畸变率(表 2)
 
  两组相比较,实验组染色体型畸变率及染色单体型畸变率明显增高,而经统计学处理后并无显着差异。但畸变细胞总数经 x2检验,p<0.05.试验组的双着丝点体和单体裂隙都比对照组高,然而并无统计学意义。【2】
 5 各组染色体畸变的关系
 
  5.1 性别与染色体畸变的关系
 
  11 例男性中共分析分裂中期细胞 850 个,19 例女性中分析分裂中期细胞 1,611 个,染色体数目的变化与染色体畸变率经统计学处理均无明显差异,表明性别与染色体畸变之间没有关系。女性中有 9个单倍体,系 1 人标本中所见,因情况特殊,未做统计学处理。
 
  5.2 长寿家族史与染色体畸变的关系
 
  在受检的 30 人中,长寿家族史明显的共 28 人。以 80 岁以上作为长寿家族史标准,则有长寿家族史者 16 人,无长寿家族史者 12 人。将两组染色体众数与自然畸变进行比较,无明显差异 .
 
  5.3 寿斑与染色体的关系
 
  根据综合报告中对寿斑分度的标准,30 例受检人中,无寿斑者 8 人,寿斑(+)者 14 人,(++)者 8 人。各组染色体众数与自然畸变率无明显差异。
 
  6 讨论
 
  6.1 分裂指数
 
  增值是细胞生命现象重要特征之一。但正常细胞的分列能力不能超过一定的限度。余祥美等报道[2],人到 80 岁以后淋巴细胞在离体培养下分裂指数显着下降。可是 Hayfick 发现,培养细胞增殖次数与供体年龄之间没有显着差别。Scheider 则报道培养细胞增殖次数与供体年龄成反比。本实验细胞分裂指数为 5.87%明显高于余氏所报道的,而与周氏报道的接近[3].可见老人的细胞仍然具有旺盛的分裂能力。
 
  6.2 染色体自然畸变率
 
  人体外周血淋巴细胞染色体畸变的自然频率越来越受到重视。因为利用染色体畸变率这个指标,可以观察环境因素对细胞结构遗传性的影响。染色体畸变自然率为 1~3%.本实验实验组畸变细胞总数为 2.11%.对照组为 1.38 %.p<0.05 具有统计学意义。文献报道,畸变细胞数随年龄增长而增加,80岁以上的人可达 3.0%.本实验结果与文献报道一致。
 
  6.3 性别与染色体畸变的关系
  
  文献报道,成年女性非整倍体可达 13 %,男性为 7 %.Court 等报道,女性在 55 岁以后,男性在65 岁以后就容易丢失性染色体。本实验组女性非整倍体细胞 13.84 %,略高于男性 12.47 %.而染色体畸变细胞总数男性 2.24 %,则略高于女性 1.99 %.说明长寿老人的性别与染色体畸变关系不密切。
 
  参考文献
  
  [1] 孙祥燮,人类衰老的细胞生物学[J].科学(中译本),1980,5:20-27.
  [2] 余祥美等,巴马县 29 名高龄老人细胞遗传学分析[J].中华老年医学杂志,1982,1(2):70-74
  [3] 周焕庚等。人体微量血液体外培养制备染色体标本的简易方法[J].中华医学杂志,1974,54(6):368-370.
  [4] 沈关心,癌肿患者淋巴细胞亚群的研究[J].武汉医学院学报,1984,13(1):17
 

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