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脂联素在脂代谢紊乱发生和发展中的作用

更新时间:2020-04-29 08:27点击:

    [摘要]目的用携带小鼠脂联素的基因过表达质粒转染小鼠,研究小鼠血浆脂联素及炎性因子分泌的影响。方法用本课题组前期构建好的小鼠pcDNA3.1-Acrp30基因过表达质粒经股四头肌注入C57BL/6J小鼠体内, 72h后检测小鼠血浆脂联素表达情况,并测定其血浆白细胞介素-2、 白细胞介素-3、白细胞介素-6、白细胞介素-8和肿瘤坏死因子- a的分泌水平。结果pcDNA3. 1-Acrp30过表达载体转染小鼠后,其血浆脂联素水平显着增高,血浆炎性因子分泌则显着下调。结论构建的小鼠ACrp30基因过表达载体能有效地增强脂联素在小鼠体内的表达并能拮抗炎性因子的分泌。
    [关键词]脂联素;过表达;炎性因子
 脂肪组织作为一个新近发现的内分泌器官,可分泌多种细胞因子。这些因子在胰岛素抵抗及2型糖尿病(T2DM)发病机制中起着重要作用。脂联素(Acrp30)也由脂肪组织分泌,在抗动脉粥样硬化调节糖脂代谢、改善胰岛素抵抗等方面具有广泛的生理功能,与糖尿病有密切的关系。本研究着重探讨其抗炎作用,首先将构建的小鼠Acrp30基因过表达质粒导入C57BL/6J小鼠体内,观察后者血浆Acrp30的水平,并检测其对小鼠炎性因子分泌的影响,旨在进一步探讨Acrp30在脂代谢紊乱发生和发展中的作用。
 
  1材料与方法
 
  1.1主要试剂
 
  Acrp30基因过表达载体为本课题组前期构建并保存;C57BL/6J小鼠购自重庆医科大学实验动物中心;酶联免疫 吸 附 法 (ELISA)小 鼠Acrp30检测试剂盒购自德国Phoenix公司;炎性因子检测试剂购自美国BD公司。
 
  1.2动物分组及处理
 
  C57BL/6J小鼠20只,8周龄,随机分为pcDNA3.1(+)空质粒注射组(NC组,n=10),pcDNA3.1-Acrp30重组真核表达质粒注射组(PA组,n=10),空载及表达质粒(1mg/kg)注射于小鼠股四头肌。于注射前及注射后72h采集空腹尾静脉血,分离血浆。
 
  1.3小鼠血浆Acrp30测定
 
  采用ELISA法测定小鼠血浆Acrp30水平,操作按照ELISA试剂盒说明书进行。以系列水平Acrp30标准品绘制A450标准曲线,根据标准曲线计算Ac-rp30水平。
 
  1.4小鼠血浆炎性因子水平测定
 
  采用流式细胞法测定小鼠血浆白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,操作按照BD公司炎性因子测定试剂盒说明书进行。
 
  1.5统计学处理
 
  数据处理应用SPSS18.0软件,采用配对样本t检验做统计学分析,各项数据资料以x±s表示。P<0.05为差异有统计学意义。
 
  2结果
 
  2.1小鼠血浆Acrp30分泌水平变化。
 
  小鼠血浆Acrp30ELISA测定结果,见表1.质粒注射后PA组血浆Acrp30水平较注射前均升高(P<0.05),而NC组在注射前后差异无统计学意义
2.2小鼠血浆炎性因子分泌水平变化
 
  小鼠血浆IL-2、IL-3、IL-6、IL-8及TNF-α流式细胞仪测定结果,见表2.质粒注射后PA组血浆5项指标水平较注射前均降低(P<0.05),而NC组在注射前后差异无统计学意义(P>0.05)。
 
  3讨论
 
  肥胖、糖尿病、代谢综合征等代谢性疾病患者都伴随炎性反应,作为内分泌器官,脂肪细胞可以分泌大量的细胞因子,其中包括Acrp30,这些细胞因子接受外界信号并对之产生反应,从而调节食欲、胰岛素敏感性、炎性反应等过程。Acrp30是一种与胰岛素抵抗密切相关的细胞因子,主要由脂肪细胞分泌,与受体(AdipoR1、AdipoR2)结合后具有增强胰岛素敏感性、抗高血糖、抗动脉粥样硬化等生物作用[1-3].另有研究表明,低Acrp30血症是动脉粥样硬化发生的独立危险因素,随着动脉粥样硬化的发展,血浆Acrp30水平呈进行性下降趋势[4].对人体的研究发现,Acrp30水平能预示T2DM和冠心病的发展,并在临床试验中表现出抗糖尿病、抗动脉粥样硬化和炎性反 应的潜力[4-5].
 
  Acrp30通过激活蛋白激酶A(PKA)信号通路,使TNF-α介导的核因子-κB(NF-κB)的活化受到抑制,从而减轻内皮细胞的炎性反应[6].对体质量指数(BMI)正常和异常人群中IL-6、IL-10、TNF-α与Acrp30关系的研究表明,BMI高的人群Acrp30表达显着降低,IL-6和TNF-α水平则升高,相反,IL-10水平则显着下降[7].可以抑制人的白细胞产生IL-10,下调巨噬细胞中前炎性细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)的产生[8].Matsubara等[9]研究发现,低Ac-rp30血症与超敏C反应蛋白血症存在负相关,提示Acrp30可能具有抗炎作用,以上研究提示Acrp30是炎性反应中重要的调节因子。
 
  为了进一步评价Acrp30和炎性因子的相互作用,本研究利用构建 的Acrp30真 核表达载 体pcDNA3.1-Acrp30转 入C57BL/6J小鼠,成功上调了小鼠血浆Acrp30水平,并发现血浆炎性因子IL-2、IL-3、IL-6、IL-8和TNF-α水平却显着受抑。
 
  结果证明,Acrp30的过表达可拮抗小鼠分泌炎性因子,从而拮抗炎性反应过程。
 

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